Русский

Выпуск 3

Опубликовано 3 июля 2023

Оценка функциональной активности нейтрофилов с применением красителей феноксазинового ряда

Нейтрофилы – основные лейкоциты крови, осуществляющие для защиты организма от патогенов фагоцитоз, образование нейтрофильных внеклеточных ловушек, дегрануляцию, а также генерацию активных форм кислорода (АФК), азота (АФА) и галогенов (АФГ). Хлорноватистая кислота (HOCl) образуется в биологических системах в присутствии пероксида водорода и хлорид-аниона в каталитическом цикле преимущественно фермента азурофильных гранул нейтрофилов – миелопероксидазы (МПО). HOCl играет важную роль в физиологических и патологических процессах, однако регистрация этого высокореакционного соединения затруднена в том числе из-за наличия многочисленных других АФК, АФА и АФГ, генерируемых клетками. В данной работе предложен комплексный подход исследования продукции АФК и АФГ нейтрофилов флуоресцентным методом с использованием феноксазиновых красителей целестинового синего B (CB) и галлоцианина (GC). Показано, что использование GC и CB позволяет оценить функциональный ответ нейтрофилов на стимулы различной природы (форболовый эфир PMA, компонент клеточной стенки бактерий fMLP, лектины растений).

Скорость изменения интенсивности флуоресценции зондов в суспензии активированных нейтрофилов. *p<0,05 относительно контроля
0
0
#активные формы кислорода#флуоресцентные краски#феноксазиновые красители

Математическая модель рецептора 3 типа к инозитол-3-фосфату (IP3R3)

Рецептор к инозитол-1,4,5-трифосфату (IP3-рецептор) играет важную роль в кальциевой сигнализации клеток. При математическом моделировании преимущественно рассматривается IP3-рецептор 2 типа, а модель IP3 -рецептора 3 типа, учитывающая динамические свойства данного канала, не предложена. Целью настоящей работы является разработка математической модели IP3-рецептора 3 типа, учитывающей нелинейный характер зависимости активности рецептора от концентрации кальция и IP3 в цитозоле.

В работе предлагается система из шести независимых обыкновенных дифференциальных уравнений для описания развития кальциевого ответа на вызванную изменением концентрации IP3 активацию в системе с IP3 -рецептором 3 типа и кальциевой АТФазой SERCA2b. Параметры модели подбирались автоматически по ранее опубликованным экспериментальным данным.

В результате исследования показано, что в системе IP3R3-SERCA2b не наблюдается осцилляций в широком диапазоне параметров. Наиболее часто возникающим режимом функционирования системы является ответ «все-или-ничего», при котором в зависимости от концентрации IP3 либо не наблюдается мобилизации кальция, либо происходит полное опустошение кальциевых депо.

Таким образом, мы заключаем, что в условиях простейшей модели IP3R3 не демонстрирует способности к поддержанию кальциевых осцилляций, что согласуется с его предполагаемой ролью основного кальциевого канала сайтов контакта митохондрий с эндоплазматическим ретикулумом.

Схема модели кальциевой сигнализации (10)-(11). При активации клетки происходит повышение концентрации инозитол-1,4,5-трисфосфата (IP3) в цитозоле клетки (обозначен розовым). IP3 инициирует открытие канала-рецептора IP3R типа 3 в мембране ЭПР (обозначен синим), что приводит к выходу ионов кальция (зеленый кружок, Ca2+) из ЭПР в цитозоль. Кальциевая АТФаза (SERCA) катализирует обратный ток ионов Ca2+ из цитозоля в ЭПР. Голубой прямоугольник обозначает спонтанную утечку кальция из ЭПР в цитозоль.
0
0
#кальциевая сигнализация#инозитол-1,4,5-трифосфат#рецептор к инозитол-1,4,5-трифосфату 3 типа#компьютерное моделирование

Преимущество применения лактадгерина для оценки экспонирования фосфатидилсерина в тромбоцитах

экспонированного фосфатидилсерина – аннексина V и лактадгерина. На примере тромбоцитов показано, что лактадгерин является более перспективным за счет большей чувствительности, и его применение, особенно в микроскопии, имеет преимущество в исследовании взаимосвязей сигнальных процессов при образовании прокоагулянтной субпопуляции тромбоцитов.

Иллюстрация тромбоцитов человека, положительных по лактадгерину, но отрицательных по аннексину V (отмечены стрелками). А – сравнение с аннексин V положительным тромбоцитом. Б – тромбоцит с функционирующими митохондриями (ТМРМ+) и связыванием с лактадгерином (помечен стрелкой). ДИК – дифференциально-интерференционный контраст; Наложение – сумма изображений всех флуоресцентных каналов и проходящего света. Длина масштабного отрезка 10 мкм, n=5.
0
0
#тромбоциты#фосфатидилсерин#лактадгерин#аннексин V

Метод регистрации мембранного потенциала тромбоцитов с использованием пэтч-клампа в конфигурации перфорированная «целая клетка»

, , , ,

В данной работе рассмотрены подходы к регистрации мембранного потенциала тромбоцитов с использованием пэтч-клампа в конфигурации перфорированная «целая клетка». Проведены записи мембранного потенциала с использованием порообразующих агентов нистатина и сапонина и выбраны оптимальные условия, позволяющие регистрировать мембранный потенциал без нарушения гигаомного контакта и влияния на функциональную активность тромбоцита. Показана возможность регистрации осцилляций мембранного потенциала тромбоцита. Предложенный подход регистрации мембранного потенциала будет полезен при исследовании роли мембранного потенциала и механизмов его регуляции в функциональных ответах тромбоцитов.

0
0
#тромбоциты#пэтч-кламп#нистатин#сапонин#мембранный потенциал