Русский

Функциональные ответы тромбоцитов и внутриклеточная сигнализация: молекулярные связи. Часть 1: ответы

, ,

Введение

Гемостаз – строго регулируемая по пространству и времени система организма человека
, необходимая для предотвращения кровопотерь при повреждении кровеносных сосудов. Ключевую роль в этой системе играют тромбоциты
[
2
Novel mouse hemostasis model for real-time determination of bleeding time and hemostatic plug composition.

Getz TM, Piatt R, Petrich BG, Monroe D, Mackman N, Bergmeier W.

Journal of Thrombosis and Haemostasis . 2015, 13, 417-425

]
. Помимо выполнения своих непосредственных физиологических функций – формирования клеточного агрегата в области повреждения кровеносных сосудов, тромбоциты важны и для других физиологических процессов: ускорение мембранно-зависимых реакций свёртывания крови
[
3,
Kinetics of Factor X activation by the membrane-bound complex of Factor IXa and Factor VIIIa.

Panteleev MA, Saenko EL, Ananyeva NM, Ataullakhanov FI.

Biochemistry Journal. 2004, 381, 779-794

4
Hysteresis-like binding of coagulation factors X/Xa to procoagulant activated platelets and phospholipids results from multistep association and membrane-dependent multimerization.

Podoplelova NA, Sveshnikova AN, Kurasawa JH, Sarafanov AG, Chambost H, Vasil’Ev SA, et al.

BiomemBiochimica et Biophysica Acta (BBA)-Biomembranesbranes. 2016, 1858, 1216-1227

]
, поддержание целостности сосудистых стенок
, регуляция иммунных ответов
[
8,
Platelet ITAM signaling is critical for vascular integrity in inflammation.

Boulaftali Y, Hess PR, Getz TM, Cholka A, Stolla M, Mackman N, et al.

Journal of Clinical Investigation. 2013, 123 (2), 908-916

9,
Editorial: Platelets and Immune Responses During Thromboinflammation.

Schattner M, Jenne CN, Negrotto S, Ho-Tin-Noe B.

Frontiers in Immunology. 2020, 11, 1079

10
he dual role of platelet-innate immune cell interactions in thrombo-inflammation.

Rayes J, Bourne JH, Brill A, Watson SP.

Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis. 2020, 4, 23-35

]
, рост и регенерация тканей
[
12
Platelets and cancer angiogenesis nexus.

Wojtukiewicz MZ, Sierko E, Hempel D, Tucker SC, Honn KV.

Cancer and Metastasis Reviews. 2017, 36, 249-262

]
. Для корректного выполнения каждой из этих функций в нужном месте и в нужное время, в тромбоцитах существует обширная система мембранных рецепторов и путей передачи внутриклеточных сигналов.
Активация тромбоцитов приводит к целому набору различных функциональных ответов
[
13
Platelets and hemostasis.

Panteleev MA, Sveshnikova AN.

Oncohematology. 2014, 9, 65-73

]
(Рис. 1). Исходя из этого, немалым является и количество положительных и отрицательных стимулов, которые должны обрабатываться внутриклеточными сигнальными сетями, чтобы тромбоцитом было принято адекватное конкретной ситуации решение
. Помимо активационных, в последние годы было показано существование и нескольких ингибиторных сигнальных путей в тромбоците
. Таким образом, внутриклеточная сигнализация в тромбоцитах, инициируемая по меньшей мере десятью основными рецепторами, состоящая из нескольких переплетённых белковых каскадов и выражающаяся различными функциональными проявлениями, может показаться весьма запутанной (Рис. 2).

Схема основных функциональных ответов тромбоцитов на активацию (каждый из них может быть остановлен игнибиторным сигналом).
Figure 1. Схема основных функциональных ответов тромбоцитов на активацию (каждый из них может быть остановлен игнибиторным сигналом).
Схема взаимодействия между активационными сигналами (тромбин, АДФ, коллаген, тромбоксан А2, vWF, подопланин и адреналин) и функциональными ответами тромбоцитов (изменение формы, выражающееся формированием филоподий; адгезия и агрегация, изображённая активацией интегринов; секреция гранул и синтез тромбоксана А2).
Figure 2. Схема взаимодействия между активационными сигналами (тромбин, АДФ, коллаген, тромбоксан А2, vWF, подопланин и адреналин) и функциональными ответами тромбоцитов (изменение формы, выражающееся формированием филоподий; адгезия и агрегация, изображённая активацией интегринов; секреция гранул и синтез тромбоксана А2).
Пути внутриклеточной сигнализации в тромбоцитах обыкновенно анализируются не как полноценная сеть, а как более простые отдельные цепочки стимул-ответ. Например: активатор X стимулирует рецептор Y, приводя к наработке вторичного мессенджера Z, который управляет дальнейшими ответами «1», «2», «3». Взаимодействие различных рецепторов, которые могли бы работать кооперативно или же, напротив, инактивировать друг друга, обычно не оценивается. Интересно, что в других областях, таких как иммунология, термины «ко-активатор» или «ко-рецептор» уже стали достаточно распространены
[
17,
IκBβ is an essential co-activator for LPS-induced IL-1β transcription in vivo.

Scheibel M, Klein B, Merkle H, Schulz M, Fritsch R, Greten FR, et al.

ournal of Experimental Medicine . 2010, 207, 2621-2630

18
Costimulation, Coinhibition and Cancer.

Inman BA, Frigola X, Dong H, Kwon ED.

Current Cancer Drug Targets . 2007, 7, 15-30

]
. Распространение сигнала по коллатеральным сигнальным путям, формирование разных ответов на разные дозы одного и того же агониста, принципы кодирования и декодирования сигнала редко обсуждаются даже за пределами области тромбоцитов
[
19
A Directed Protein Interaction Network for Investigating Intracellular Signal Transduction.

Vinayagam A, Stelzl U, Foulle R, Plassmann S, Zenkner M, Timm J, et al.

Science Signaling. 2011, 4, rs8

]
, и тем более почти никогда для тромбоцитов.
Другой обычно упускаемый тип сигнализации в тромбоцитах — это механочувствительность. Данный факт тем более удивителен, что вся жизнь тромбоцитов проходит в потоках крови разных скоростей. Имеется достаточно сведений в пользу того, что тромбоциты могут «ощущать» как скорость сдвига кровотока, так и его турбулентность
[
20,
Platelet Mechanotransduction.

Hansen CE, Qiu Y, McCarty OJT, Lam WA.

Annual Review of Biomedical Engineering. 2018, 20, 253-275

22,
Evidence for shear-mediated Ca2+ entry through mechanosensitive cation channels in human platelets and a megakaryocytic cell line.

Ilkan Z, Wright JR, Goodall AH, Gibbins JM, Jones CI, Mahaut-Smith MP.

Journal of Biological Chemistry. 2017, 292, 9204-9217

]
. Этот вопрос будет обсуждаться в следующей части данной серии обзоров. В этой части мы сосредоточимся на функциональных ответах тромбоцитов, а не на инициирующих их сигналах, выделим основные принципы обработки сигналов тромбоцитов и принятия ими решений. Не вдаваясь в подробности внутриклеточной сигнализации в тромбоцитах, мы стремимся прежде всего показать функциональные проявления этой сигнализации и ситуации, в которых эти проявления важны.
 

Функциональные ответы и их непосредственные причины

О функциональных ответах тромбоцитов мы будем говорить прежде всего в контексте гемостаза, так как данные виды ответов наиболее подробно изучены. Минимальный набор тромбоцитарных функций, необходимых для реакции на на повреждение, обычно включает в себя активацию интегринов aIIbb3
[
24
Platelet Integrin αIIbβ3: Mechanisms of Activation and Clustering; Involvement into the Formation of the Thrombus Heterogeneous Structure.

Kaneva VN, Martyanov AA, Morozova DS, Panteleev MA, Sveshnikova AN.

Biochemistry (Moscow), Supplement Series A: Membrane and Cell Biology. 2019, 13, 97-110

]
, секрецию плотных гранул
, секрецию альфа-гранул
[
26
Selective sorting of alpha-granule proteins.

Jr JEI, Battinelli EM.

Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2009, 7, 173-176

]
, синтез тромбоксана А2, изменение формы, контракцию и прокоагулянтную активность
[
28
Kinetics and mechanics of clot contraction are governed by the molecular and cellular composition of the blood.

Tutwiler V, Litvinov RI, Lozhkin AP, Peshkova AD, Lebedeva T, Ataullakhanov FI, et al.

Blood. 2016, 127, 149-159

]
(Рис. 1). Первичная адгезия тромбоцитов, управляемая гликопротеином Ib, не учитывается, так как она не требует активации тромбоцитов
. Важно отметить, что все вышеоговорённые функциональные ответы, вероятно, не одинаково важны или же, что более верно, не каждый из них был чётко продемонстрирован при гемостазе.

Активация интегринов.

Активация интегринов, считается наиболее важным функциональным ответом тромбоцитов. В случае отсутствия интегринов на поверхности тромбоцитов человека, как, например, при тромбастении Гланцмана, могут наблюдаться тяжёлые кровотечения
. На поверхности тромбоцитов присутствует, приблизительно, 100000 молекул интегринов aIIbb3, которые могут значительно изменять свою аффинность к фактору фон Виллебранда и фибриногену в процессе активации, напрямую влияя на формирование тромбоцитарных агрегатов
[
24
Platelet Integrin αIIbβ3: Mechanisms of Activation and Clustering; Involvement into the Formation of the Thrombus Heterogeneous Structure.

Kaneva VN, Martyanov AA, Morozova DS, Panteleev MA, Sveshnikova AN.

Biochemistry (Moscow), Supplement Series A: Membrane and Cell Biology. 2019, 13, 97-110

]
. Считается, что все активаторы тромбоцитов, включая и биомеханическую активацию тромбоцитов фактором фон Виллебранда через рецептор GPIb, до какой-то степени приводят к активации интегринов
. Данный функциональный ответ тромбоцитов градуален, и, вероятно, содержит промежуточные фазы активации
. Непосредственной причиной перехода интегрина между состояниями является образование большого комплекса белков, ассоциированного с цитоскелетом, на цитозольной стороне плазматической мембраны. Решающую структурную роль в этом комплексе играют белки талин-1
[
32
Talin-1 is the principal platelet Rap1 effector of integrin activation.

Lagarrigue F, Paul DS, Gingras AR, Valadez AJ, Sun H, Lin J, et al.

Blood. 2020, 136, 1180-1190

]
и киндлин-3
[
33
Kindlin supports platelet integrin αIIbβ3 activation by interacting with paxillin.

Gao J, Huang M, Lai J, Mao K, Sun P, Cao Z, et al.

Journal of Cell Science. 2017, 130, 3764-3775

]
, а переключателем передачи сигнала, запускающим формирование данного комплекса, считается малая растворимая цитозольная ГТФаза Rap1-GTP
[
32,
Talin-1 is the principal platelet Rap1 effector of integrin activation.

Lagarrigue F, Paul DS, Gingras AR, Valadez AJ, Sun H, Lin J, et al.

Blood. 2020, 136, 1180-1190

34
Rap1-Rac1 circuits potentiate platelet activation.

Stefanini L, Boulaftali Y, Ouellette TD, Holinstat M, Désiré L, Leblond B, et al.

Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 2012, 32, 434-441

]
. Помимо αIIbβ3, тромбоциты имеют ряд других интегринов, специфичных для коллагена, фибронектина, ламинина и других молекул. Их значимость для гемостаза ясна в меньшей степени, в то время как механизмы активации кажутся похожими
[
35,
Platelet integrin α6β1 controls lung metastasis through direct binding to cancer cell-derived ADAM9.

Mammadova-Bach E, Zigrino P, Brucker C, Bourdon C, Freund M, De Arcangelis A, et al.

JCI Insight. 2016, 1 (14), e88245

36
he basement membrane protein nidogen-1 supports platelet adhesion and activation.

Lakshmanan HHS, Melrose AR, Sepp A-LI, Mitrugno A, Ngo ATP, Khader A, et al.

Platelets. 2020, 32 (3), 424-428

]
.

Секреция плотных гранул.

Плотные (или дельта-, δ-) гранулы представляют собой специфичные для тромбоцитов органеллы, содержимое которых высвобождается при активационном сигнале
. Плотные гранулы содержат, в основном, низкомолекулярные соединения, главным из которых является АДФ, способный активировать соседние тромбоциты
[
39
Assessment of the effects of Syk and BTK inhibitors on GPVI-mediated platelet signaling and function.

Zheng TJ, Lofurno ER, Melrose AR, Lakshmanan HHS, Pang J, Phillips KG, et al.

American Journal of Physiology: Cell Physiology. 2021, NaN, NaN

]
. Другим компонентом, который в последнее время привлекает большое внимание, является полифосфат, имеющий ряд потенциальных ролей в каскаде свертывания крови
[
40,
A Flow Cytometry-Based Assay for Procoagulant Platelet Polyphosphate.

Labberton L, Long AT, Gendler SJ, Snozek CL, Stavrou EX, Nickel KF, et al.

Cytometry Part B: Clinical Cytometry. 2018, 94, 369-373

41
Platelet polyphosphate induces fibroblast chemotaxis and myofibroblast differentiation.

Suess PM, Smith SA, Morrissey JH.

Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2020, 18, 3043-3052

]
. Функциональная роль других компонентов плотных гранул, таких как АТФ, серотонин и кальций ясна в меньшей степени
. В отличие от активации интегринов, высвобождение плотных гранул происходит только при сильной стимуляции. Так, при стимуляции тромбоцитов АДФ (считающимся слабым активатором), секреция плотных гранул происходит достаточно слабо
[
43
The effect of P2Y12 inhibition on platelet activation assessed with aggregation- and flow cytometry-based assays.

Leunissen TC, Wisman PP, van Holten TC, de Groot PG, Korporaal SJ, Koekman AC, et al.

Platelets. 2017, 28, 567-575

]
. Внутриклеточный механизм дифференциального высвобождения плотных гранул до сих пор остается спорным
и будет обсуждаться в следующей части этого обзора. Ключевым регулятором передачи сигнала, опосредующим эти процессы, предположительно, являются различные изоформы протеинкиназы C
и мембранные фосфатидилинозитолы
.

Секреция альфа гранул.

Альфа (α-) гранулы представляют собой другой тип тромбоцитарных внутриклеточных везикул, высвобождаемых при активации тромбоцитов. Интересно, что в отличие от плотных гранул, a-гранулы не являются обязательно сферическими структурами
. a-гранулы несут в себе в основном белки, среди которых фибриноген, фактор фон Виллебранда, фактор V, ингибитор компонента системы комплемента C1, факторы роста и другие молекулы
[
26,
Selective sorting of alpha-granule proteins.

Jr JEI, Battinelli EM.

Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2009, 7, 173-176

49
Platelet Releasate Proteome Profiling Reveals a Core Set of Proteins with Low Variance between Healthy Adults.

Parsons MEM, Szklanna PB, Guerrero JA, Wynne K, Dervin F, O’Connell K, et al.

Proteomics. 2018, 18, e1800219

]
. Мембраны альфа-гранул содержат дополнительные интегрины и Р-селектин. Некоторые исследования предполагают, что компоненты тромбоцитов, активирующие контактный путь свёртывания плазмы крови, содержатся именно в альфа-, а в плотных гранулах
[
50
Platelet surface-associated activation and secretion-mediated inhibition of coagulation factor XII.

Zakharova NV, Artemenko EO, Podoplelova NA, Sveshnikova AN, Demina IA, Ataullakhanov FI, et al.

PloS One. 2015, 10, e0116665

]
. Имеются данные о том, что существуют подтипы альфа-гранул с разным содержанием, высвобождаемые при разной стимуляции
. Белки в альфа-гранулах участвуют в агрегации тромбоцитов, коагуляции, ангиогенезе, иммунитете, воспалении, поддержании/восстановлении целостности сосудистой стенки и других жизненно важных процессах
. Тем не менее, единственным компонентом альфа-гранул, гемостатическая функция которого хорошо установлена, является фактор V, который присутствует в них в значительных количествах и в частично активированной форме. Важность тромбоцитарного фактора V подтверждена как на животных моделях, так и для людей
. Интересно, что белки альфа-гранул остаются связанными с прокоагулянтными тромбоцитами [56], образуя зависимую от полимеризации фибрина и активности трансглутаминазы «шапку»
[
57
Procoagulant platelets form an α-granule protein-covered “cap” on their surface that promotes their attachment to aggregates.

Abaeva AA, Canault M, Kotova YN, Obydennyy SI, Yakimenko AO, Podoplelova NA, et al.

Journal of Biological Chemistry. 2013, 288, 29621-29632

]
. Функция данных структур не до конца ясна, хотя было показано, что «шапка» необходима для прикрепления прокоагулянтных тромбоцитов к агрегатам
[
58
Identification of different proaggregatory abilities of activated platelet subpopulations.

Yakimenko AO, Verholomova FY, Kotova YN, Ataullakhanov FI, Panteleev MA.

Biophysical Journal. 2012, 102, 2261-2269

]
. Считается, что высвобождение альфа-гранул инициируется почти всеми активаторами тромбоцитов
[
59,
A simple, whole blood method for assessment of platelet function: application to dietary intervention.

Allman-Farinelli MA, Bendall L, Troy J, Versluis C, Hall D, Favaloro EJ, et al.

Thrombosis Research. 1998, 90, 163-169

60,
Close relationship between the platelet activation marker CD62 and the granular release of platelet-derived growth factor.

Graff J, Klinkhardt U, Schini-Kerth VB, Harder S, Franz N, Bassus S, et al.

Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 2002, 300, 952-957

]
.

Прокоагулянтная активность

Помимо «про-агрегантных» тромбоцитов, есть и другая субпопуляция – прокоагулянтные тромбоциты, на поверхности которых происходит ускорение мембрана-зависимых реакций свёртывания плазмы крови. Более того, исходя из последних данных, можно предположить, что прокоагулянтная активность данной субпопуляции регулируется специальной клеточной структурой в тромбоцитах
[
62
Coagulation factors bound to procoagulant platelets concentrate in cap structures to promote clotting.

Podoplelova NA, Sveshnikova AN, Kotova YN, Eckly A, Receveur N, Nechipurenko DYu, et al.

Blood. 2016, 128, 1745-1755

]
. Следовательно, формирование прокоагулянтной субпопуляции тромбоцитов – функциональный ответ, механизмы развития которого значимо отличаются от механизмов других ответов, которые более равномерно происходят в популяции тромбоцитов. При формировании субпопуляции прокоагулянтных тромбоцитов происходит инактивация интегринов
[
63
Dual Mechanism of Integrin αIIbβ3 Closure in Procoagulant Platelets.

Mattheij NJA, Gilio K, van Kruchten R, Jobe SM, Wieschhaus AJ, Chishti AH, et al.

Journal of Biological Chemistry. 2013, 288, 13325-13336

]
. Прокоагулянтные тромбоциты образуются при сильной стимуляции тромбином или агонистами гликопротеина VI (например, коллагена) по пути некроза
, вызванного перегрузкой митохондрий кальцием
[
66
Mechanisms of increased mitochondria-dependent necrosis in Wiskott-Aldrich syndrome platelets.

Obydennyi SI, Artemenko EO, Sveshnikova AN, Ignatova AA, Varlamova TV, Gambaryan S, et al.

Haematologica. 2020, 105, 1095-1106

]
. Интересно, что и более слабые активаторы, такие как АДФ, способны тонко регулировать образование прокоагулянтных тромбоцитов
[
67
Modulation and pre-amplification of PAR1 signaling by ADP acting via the P2Y12 receptor during platelet subpopulation formation.

Shakhidzhanov SS, Shaturny VI, Panteleev MA, Sveshnikova AN.

Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-General Subjects. 2015, 1850, 2518-2529

]
.

Другие ответы тромбоцитов

Самый ранний ответ тромбоцитов на любые виды активации, даже очень незначительные, — это изменение формы от эллипсоида к сфере, связанное с реорганизацией периферического кольца микротрубочек
[
68,
Motor-driven marginal band coiling promotes cell shape change during platelet activation.

Diagouraga B, Grichine A, Fertin A, Wang J, Khochbin S, Sadoul K.

Journal of Cell Biology. 2014, 204, 177-185

69
Tubulin in Platelets: When the Shape Matters.

Cuenca-Zamora EJ, Ferrer-Marín F, Rivera J, Teruel-Montoya R.

International Journal of Molecular Sciences. 2019, 20, NaN

]
. Функциональная значимость этого перехода не ясна. После изменения формы на сферическую происходит образование ламеллиподий и филоподий, приводящих к увеличению площади поверхности тромбоцитов и, как следствие, увеличению площади поверхности контакта с тромбоцитов друг с другом в агрегате, а также со стенкой сосудов
[
70
Platelet actin nodules are podosome-like structures dependent on Wiskott-Aldrich syndrome protein and ARP2/3 complex.

Poulter NS, Pollitt AY, Davies A, Malinova D, Nash GB, Hannon MJ, et al.

Nature Communications. 2015, 6, 7254

]
. Эти стадии вызываются перестройкой актинового цитоскелета
, в значительной степени индуцируемой тромбином и поддерживаемой АДФ. В меньшей степени подобное «распластывание» тромбоцитов зависит от активации коллагеном
. Способность тромбоцитов изменять свою форму значительно влияет на упаковку тромбоцитов внутри тромба, что приводит к увеличению плотности тромбов и снижению их пористости
[
72
Platelet packing density is an independent regulator of the hemostatic response to injury.

Mirramezani M, Herbig BA, Stalker TJ, Nettey L, Cooper M, Weisel JW, et al.

Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2018, 16, 973-983

]
. Неясно, насколько изменение формы принципиально необходимо с точки зрения формирования плотного тромбоцитарного сгустка, поскольку некорректно регулируемая полимеризация актина у пациентов с синдромом Вискотта-Олдрича приводит к формированию уменьшенных тромбоцитов, но не к их дисфункции
[
66,
Mechanisms of increased mitochondria-dependent necrosis in Wiskott-Aldrich syndrome platelets.

Obydennyi SI, Artemenko EO, Sveshnikova AN, Ignatova AA, Varlamova TV, Gambaryan S, et al.

Haematologica. 2020, 105, 1095-1106

73
WASP plays a novel role in regulating platelet responses dependent on αIIbβ3 integrin outside-in signalling.

Shcherbina A, Cooley J, Lutskiy MI, Benarafa C, Gilbert GE, Remold‐O’Donnell E.

British Journal of Haematology. 2010, 148, 416-427

]
.
Другой ранний и легко индуцируемый ответ - синтез тромбоксана А2, производимый фосфолипазой А2, циклооксигеназой (в основном ЦОГ-1) и тромбоксансинтазой
[
74
Platelets, diabetes and myocardial ischemia/reperfusion injury.

Russo I, Penna C, Musso T, Popara J, Alloatti G, Cavalot F, et al.

Cardiovascular Diabetology. 2017, 16, NaN

]
. Тромбоксан А2 представляет собой липидный эйкозаноид, действующий на тромбоциты подобно АДФ
. До сих пор неясно, может ли тромбоксан А2 активировать тромбоцит, произведший его. На первом этапе синтеза тромбоксана в тромбоцитах арахидоновая кислота отрезается от мембранных фосфолипидов фосфолипазой А2, а на втором этапе происходит непосредственно образование тромбоксана А2 в результате активности ЦОГ и тромбоксансинтазы. Интересно, что при синтезе тромбоксана единственной строго регулируемой стадией является стадия активации фосфолипазы А2. Поэтому продукция тромбоксана А2 покоящимися тромбоцитами может быть индуцирована при добавлении арахидоновой кислоты к суспензии тромбоцитов, что позволяет «обойти» стадию активности фосфолипазы А2
[
76
Is arachidonic acid stimulation really a test for the response to aspirin? Time to think again?

Olechowski B, Ashby A, Mariathas M, Khanna V, Mahmoudi M, Curzen N.

Expert Review of Cardiovascular Therapy. 2017, 15, 35-46

]
. Тромбоциты имеют две изоформы фосфолипаз A2, C- и I-. Первый активируется при небольшом повышении концентрации кальция в цитозоле, и, вероятно, поэтому все классические активаторы тромбоцитов вызывают синтез тромбоксана. Второй тип фосфолипазы А2 активируется независимо от кальция, и его роль в тромбоцитах еще не ясна​​
. ЦОГ-1 инактивируется аспирином и является одной из основных мишеней антиагрегационной терапии, назначаемой пациентам с болезнями сердечно-сосудистой системы. Таким образом, можно предположить важность синтеза тромбоксана А2 для формирования артериальных тромбов
.
Контракция тромбоцитов, иногда называемая «ретракцией», происходит на более поздней стадии образования пробки/тромба и происходит в результате классического взаимодействия актин/миозин
[
79
The critical role of myosin IIA in platelet internal contraction.

Johnson GJ, Leis LA, Krumwiede MD, White JG.

Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2007, 5, 1516-1529

]
. Контракция наблюдается при активации тромбоцитов различными агонистами, однако, сигнальные пути, запускающие контракцию, в настоящий момент малоизучены. Показано, что передача сигналов интегринами «снаружи-внутрь» является ключевой для этого процесса
. Кроме того, кальций-зависимый фермент, киназа легкой цепи миозина II (КЛЦМ) также важна для ретракции
[
81
Biphasic myosin II light chain activation during clot retraction.

Egot M, Kauskot A, Lasne D, Gaussem P, Bachelot-Loza C.

Thrombosis and Haemostasis. 2013, 110, 1215-1222

]
. Недавние исследования показали, что контракция может быть необходима при перестройке архитектуры тромба. Например, при вытеснении прокоагулянтных тромбоцитов на периферию тромбов для ускорения полимеризации фибрина в этих областях
[
27
Clot contraction drives the translocation of procoagulant platelets to thrombus surface.

Nechipurenko DY, Receveur N, Yakimenko AO, Shepelyuk TO, Yakusheva AA, Kerimov RR, et al.

Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 2019, 39, 37-47

]
, для организации ишемических тромбов
[
82
Quantitative Morphology of Cerebral Thrombi Related to Intravital Contraction and Clinical Features of Ischemic Stroke.

Khismatullin RR, Nagaswami C, Shakirova AZ, Vrtková A, Procházka V, Gumulec J, et al.

Stroke. 2020, 51, 3640-3650

]
или для повышения концентрации тромбоцитов на периферии фибринового сгустка, а также для механического увеличение локальной плотности фибрина
[
83
Asymmetrical Forces Dictate the Distribution and Morphology of Platelets in Blood Clots.

Kovalenko TA, Giraud M-N, Eckly A, Ribba A-S, Proamer F, Fraboulet S, et al.

Cells. 2021, 10, 584

]
.
 

Заключение

Некоторые из тромбоцитарных ответов имеют решающее значение для образования тромбоцитарной пробки (интегрины, плотные гранулы, тромбоксан А2), в то время как другие необходимы, скорее, для усиления свёртывания плазмы крови (прокоагулянтная активность, альфа-гранулы). Другие ответы, хотя и являются важными, имеют менее четко определенную область применимости, например, контракция и изменение формы.
Эти ответы организованы в пространстве-времени: они возникают на разных стадиях в разных частях тромба (рис. 3). Разные степени активации интегринов необходимы для формирования всего тела тромба: плотно упакованных регионов с сильно активированными тромбоцитами в «ядре» тромба и более «рыхлых» регионов слабо активированных тромбоцитов на периферии тромба. Высвобождение плотных гранул принципиально важно для активации тромбоцитов на небольшом удалении от поврежденной области. Альфа-гранулы и прокоагулянтные тромбоциты необходимы для образования фибрина и затвердевания тромба.
Для всех этих ответов существует иерархия тромбоцитарных ответов по степени их силы: некоторые из ответов тромбоциты индуцируются при всех или практически всех видах стимуляции (высвобождение a-гранул, слабая активация интегринов), в то время как другие требуют сильной активации (плотные гранулы, прокоагулянтная активность). Некоторые из ответов являются постепенными, что означает, что реакция постепенно увеличивается в широком диапазоне условий активации (плотные гранулы), в то время как другие похожи на триггерные, что означает, что они либо полностью реализованы, либо не реализованы вообще (альфа-гранулы).
Взаимодействие сигнальных путей, а также кодирование и декодирование информации, порождающие вышеописанные функциональные ответы, мы рассмотрим в следующей части обзора. В качестве заключительной ремарки стоит упомянуть, что именно использование методов современной системной биологии
[
84,
Interspecies differences in protein expression do not impact the spatiotemporal regulation of glycoprotein VI mediated activation.

Dunster JL, Unsworth AJ, Bye AP, Haining EJ, Sowa MA, Di Y, et al.

Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2020, 18, 485-496

85
Control of Platelet CLEC-2-Mediated Activation by Receptor Clustering and Tyrosine Kinase Signaling.

Martyanov AA, Balabin FA, Dunster JL, Panteleev MA, Gibbins JM, Sveshnikova AN.

Biophysical Journal. 2020, 118, 2641-2655

]
в значительной степени облегчает наше понимание взаимосвязи рецептор-функция тромбоцитов.
Функциональные ответы тромбоцитов при формировании артериального тромба.
Figure 3. Функциональные ответы тромбоцитов при формировании артериального тромба.

Вклад авторов

A.N.S. рисовала картинки, писала текст и редактировала статью; M.G.S. рисовала картинки; M.A.P. курировал проект, писал текст и редактировал статью. Все авторы прочитали и согласились с опубликованной версией рукописи.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Финансирование

Исследование было поддержано Российским Научным Фондом (Грант 21-74-20087).

Библиографические ссылки статьи:

  1. Hemostasis and thrombosis beyond biochemistry: roles of geometry, flow and diffusion.

    Panteleev MA, Dashkevich NM, Ataullakhanov FI.

    Thrombosis Research. 2015, 136, 699-711

  2. Novel mouse hemostasis model for real-time determination of bleeding time and hemostatic plug composition.

    Getz TM, Piatt R, Petrich BG, Monroe D, Mackman N, Bergmeier W.

    Journal of Thrombosis and Haemostasis . 2015, 13, 417-425

  3. Kinetics of Factor X activation by the membrane-bound complex of Factor IXa and Factor VIIIa.

    Panteleev MA, Saenko EL, Ananyeva NM, Ataullakhanov FI.

    Biochemistry Journal. 2004, 381, 779-794

  4. Hysteresis-like binding of coagulation factors X/Xa to procoagulant activated platelets and phospholipids results from multistep association and membrane-dependent multimerization.

    Podoplelova NA, Sveshnikova AN, Kurasawa JH, Sarafanov AG, Chambost H, Vasil’Ev SA, et al.

    BiomemBiochimica et Biophysica Acta (BBA)-Biomembranesbranes. 2016, 1858, 1216-1227

  5. Platelets and vascular integrity.

    Deppermann C.

    Platelets. 2018, 29, 549-555

  6. Physiological and pathophysiological aspects of blood platelet activation through CLEC-2 receptor.

    Martyanov AA, Kaneva VN, Panteleev MA, Sveshnikova AN.

    Oncohematology. 2018, 13, 83-90

  7. How platelets safeguard vascular integrity: Platelets and vascular integrity.

    Ho-Tin-Noé B, Demers M, Wagner DD.

    Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2011, 9, 56-65

  8. Platelet ITAM signaling is critical for vascular integrity in inflammation.

    Boulaftali Y, Hess PR, Getz TM, Cholka A, Stolla M, Mackman N, et al.

    Journal of Clinical Investigation. 2013, 123 (2), 908-916

  9. Editorial: Platelets and Immune Responses During Thromboinflammation.

    Schattner M, Jenne CN, Negrotto S, Ho-Tin-Noe B.

    Frontiers in Immunology. 2020, 11, 1079

  10. he dual role of platelet-innate immune cell interactions in thrombo-inflammation.

    Rayes J, Bourne JH, Brill A, Watson SP.

    Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis. 2020, 4, 23-35

  11. Heat-treated human platelet pellet lysate modulates microglia activation, favors wound healing and promotes neuronal differentiation in vitro.

    Nebie O, Barro L, Wu Y-W, Knutson F, Buée L, Devos D, et al.

    Platelets. 2021, 32 (2), 226-237

  12. Platelets and cancer angiogenesis nexus.

    Wojtukiewicz MZ, Sierko E, Hempel D, Tucker SC, Honn KV.

    Cancer and Metastasis Reviews. 2017, 36, 249-262

  13. Platelets and hemostasis.

    Panteleev MA, Sveshnikova AN.

    Oncohematology. 2014, 9, 65-73

  14. Mathematical Techniques for Understanding Platelet Regulation and the Development of New Pharmacological Approaches. In: Gibbins JM, Mahaut-Smith M, editors. Platelets and Megakaryocytes 

    Dunster JL, Panteleev MA, Gibbins JM, Sveshnikova AN.

    Advanced Protocols and Perspectives, New York, NY: Springer. 2018, 4, 255-279

  15. ITIM receptors: more than just inhibitors of platelet activation.

    Coxon CH, Geer MJ, Senis YA.

    Blood. 2017, 129, 3407-3418

  16. Uncoupling ITIM receptor G6b-B from tyrosine phosphatases Shp1 and Shp2 disrupts murine platelet homeostasis.

    Geer MJ, van Geffen JP, Gopalasingam P, Vögtle T, Smith CW, Heising S, et al.

    Blood. 2018, 132, 1413-1425

  17. IκBβ is an essential co-activator for LPS-induced IL-1β transcription in vivo.

    Scheibel M, Klein B, Merkle H, Schulz M, Fritsch R, Greten FR, et al.

    ournal of Experimental Medicine . 2010, 207, 2621-2630

  18. Costimulation, Coinhibition and Cancer.

    Inman BA, Frigola X, Dong H, Kwon ED.

    Current Cancer Drug Targets . 2007, 7, 15-30

  19. A Directed Protein Interaction Network for Investigating Intracellular Signal Transduction.

    Vinayagam A, Stelzl U, Foulle R, Plassmann S, Zenkner M, Timm J, et al.

    Science Signaling. 2011, 4, rs8

  20. Platelet Mechanotransduction.

    Hansen CE, Qiu Y, McCarty OJT, Lam WA.

    Annual Review of Biomedical Engineering. 2018, 20, 253-275

  21. An integrin αIIbβ3 intermediate affinity state mediates biomechanical platelet aggregation.

    Chen Y, Ju LA, Zhou F, Liao J, Xue L, Su QP, et al.

    Nature Materials. 2019, 18, 760-769

  22. Evidence for shear-mediated Ca2+ entry through mechanosensitive cation channels in human platelets and a megakaryocytic cell line.

    Ilkan Z, Wright JR, Goodall AH, Gibbins JM, Jones CI, Mahaut-Smith MP.

    Journal of Biological Chemistry. 2017, 292, 9204-9217

  23. Turbulence Activates Platelet Biogenesis to Enable Clinical Scale Ex Vivo Production.

    Ito Y, Nakamura S, Sugimoto N, Shigemori T, Kato Y, Ohno M, et al.

    Cell. 2018, 174, 636-648

  24. Platelet Integrin αIIbβ3: Mechanisms of Activation and Clustering; Involvement into the Formation of the Thrombus Heterogeneous Structure.

    Kaneva VN, Martyanov AA, Morozova DS, Panteleev MA, Sveshnikova AN.

    Biochemistry (Moscow), Supplement Series A: Membrane and Cell Biology. 2019, 13, 97-110

  25. Platelet dense granule secretion plays a critical role in thrombosis and subsequentvascular remodeling in atherosclerotic mice.

    King SM, McNamee RA, Houng AK, Patel R, Brands M, Reed GL.

    Circulation. 2009, 120, 785-791

  26. Selective sorting of alpha-granule proteins.

    Jr JEI, Battinelli EM.

    Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2009, 7, 173-176

  27. Clot contraction drives the translocation of procoagulant platelets to thrombus surface.

    Nechipurenko DY, Receveur N, Yakimenko AO, Shepelyuk TO, Yakusheva AA, Kerimov RR, et al.

    Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 2019, 39, 37-47

  28. Kinetics and mechanics of clot contraction are governed by the molecular and cellular composition of the blood.

    Tutwiler V, Litvinov RI, Lozhkin AP, Peshkova AD, Lebedeva T, Ataullakhanov FI, et al.

    Blood. 2016, 127, 149-159

  29. Ristocetin-dependent, but not botrocetin-dependent, binding of von Willebrand factor to the platelet glycoprotein Ib-IX-V complex correlates with shear-dependent interactions.

    Dong JF, Berndt MC, Schade A, McIntire LV, Andrews RK, López JA.

    Blood. 2001, 97, 162-168

  30. Inherited platelet diseases with normal platelet count: phenotypes, genotypes and diagnostic strategy.

    Nurden P, Stritt S, Favier R, Nurden AT.

    Haematologica. 2021, 106, 337-350

  31. RAP GTPases and platelet integrin signaling.

    Stefanini L, Bergmeier W.

    Platelets. 2019, 30, 41-47

  32. Talin-1 is the principal platelet Rap1 effector of integrin activation.

    Lagarrigue F, Paul DS, Gingras AR, Valadez AJ, Sun H, Lin J, et al.

    Blood. 2020, 136, 1180-1190

  33. Kindlin supports platelet integrin αIIbβ3 activation by interacting with paxillin.

    Gao J, Huang M, Lai J, Mao K, Sun P, Cao Z, et al.

    Journal of Cell Science. 2017, 130, 3764-3775

  34. Rap1-Rac1 circuits potentiate platelet activation.

    Stefanini L, Boulaftali Y, Ouellette TD, Holinstat M, Désiré L, Leblond B, et al.

    Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 2012, 32, 434-441

  35. Platelet integrin α6β1 controls lung metastasis through direct binding to cancer cell-derived ADAM9.

    Mammadova-Bach E, Zigrino P, Brucker C, Bourdon C, Freund M, De Arcangelis A, et al.

    JCI Insight. 2016, 1 (14), e88245

  36. he basement membrane protein nidogen-1 supports platelet adhesion and activation.

    Lakshmanan HHS, Melrose AR, Sepp A-LI, Mitrugno A, Ngo ATP, Khader A, et al.

    Platelets. 2020, 32 (3), 424-428

  37. Platelet Munc13-4 regulates hemostasis, thrombosis and airway inflammation.

    Cardenas EI, Breaux K, Da Q, Flores JR, Ramos MA, Tuvim MJ, et al.

    Haematologica. 2018, 103, 1235-1244

  38. Platelet-specific deletion of SNAP23 ablates granule secretion, substantially inhibiting arterial and venous thrombosis in mice.

    Williams CM, Li Y, Brown E, Poole AW.

    Blood Advances. 2018, 2, 3627-3636

  39. Assessment of the effects of Syk and BTK inhibitors on GPVI-mediated platelet signaling and function.

    Zheng TJ, Lofurno ER, Melrose AR, Lakshmanan HHS, Pang J, Phillips KG, et al.

    American Journal of Physiology: Cell Physiology. 2021, NaN, NaN

  40. A Flow Cytometry-Based Assay for Procoagulant Platelet Polyphosphate.

    Labberton L, Long AT, Gendler SJ, Snozek CL, Stavrou EX, Nickel KF, et al.

    Cytometry Part B: Clinical Cytometry. 2018, 94, 369-373

  41. Platelet polyphosphate induces fibroblast chemotaxis and myofibroblast differentiation.

    Suess PM, Smith SA, Morrissey JH.

    Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2020, 18, 3043-3052

  42. Sorting machineries: how platelet-dense granules differ from α-granules.

    Chen Y, Yuan Y, Li W.

    Bioscience Reports. 2018, 38, NaN

  43. The effect of P2Y12 inhibition on platelet activation assessed with aggregation- and flow cytometry-based assays.

    Leunissen TC, Wisman PP, van Holten TC, de Groot PG, Korporaal SJ, Koekman AC, et al.

    Platelets. 2017, 28, 567-575

  44. Diverse functions of protein kinase C isoforms in platelet activation and thrombus formation.

    Harper MT, Poole AW.

    Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2010, 8, 454-462

  45. Differential role of protein kinase C delta isoform in agonist-induced dense granule secretion in human platelets.

    Murugappan S, Tuluc F, Dorsam RT, Shankar H, Kunapuli SP.

    Journal of Biological Chemistry. 2004, 279, 2360-2367

  46. Regulation of membrane trafficking by signalling on endosomal and lysosomal membranes.

    Li X, Garrity AG, Xu H.

    Journal of Physiology. 2013, 591, 4389-4401

  47. An early endosome–derived retrograde trafficking pathway promotes secretory granule maturation.

    Ma C-IJ, Yang Y, Kim T, Chen CH, Polevoy G, Vissa M, et al.

    Journal of Cell Biology. 2020, 219, e201808017

  48. Structural analysis of resting mouse platelets by 3D-EM Reveals an unexpected variation in α-granule shape.

    Pokrovskaya I, Tobin M, Desai R, Aronova MA, Kamykowski JA, Zhang G, et al.

    Platelets. 2020, NaN, 1-10

  49. Platelet Releasate Proteome Profiling Reveals a Core Set of Proteins with Low Variance between Healthy Adults.

    Parsons MEM, Szklanna PB, Guerrero JA, Wynne K, Dervin F, O’Connell K, et al.

    Proteomics. 2018, 18, e1800219

  50. Platelet surface-associated activation and secretion-mediated inhibition of coagulation factor XII.

    Zakharova NV, Artemenko EO, Podoplelova NA, Sveshnikova AN, Demina IA, Ataullakhanov FI, et al.

    PloS One. 2015, 10, e0116665

  51. Distinct platelet packaging, release, and surface expression of proangiogenic and antiangiogenic factors on different platelet stimuli.

    Chatterjee M, Huang Z, Zhang W, Jiang L, Hultenby K, Zhu L, et al.

    Blood. 2011, 117, 3907-3911

  52. The platelet release reaction: granules’ constituents, secretion and functions.

    Rendu F, Brohard-Bohn B.

    Platelets. 2001, 12, 261-273

  53. The life cycle of platelet granules.

    Sharda A, Flaumenhaft R.

    F1000Research. 2018, 7, 236

  54. Platelet secretion: From haemostasis to wound healing and beyond.

    Golebiewska EM, Poole AW.

    Blood Reviews. 2015, 29, 153-162

  55. Platelets and platelet-derived factor Va confer hemostatic competence in complete factor V deficiency.

    Bouchard BA, Chapin J, Brummel-Ziedins KE, Durda P, Key NS, Tracy PB.

    Blood. 2015, 125, 3647-3650

  56. Coated-platelets: an emerging component of the procoagulant response.

    Dale GL.

    Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2005, 3, 2185-2192

  57. Procoagulant platelets form an α-granule protein-covered “cap” on their surface that promotes their attachment to aggregates.

    Abaeva AA, Canault M, Kotova YN, Obydennyy SI, Yakimenko AO, Podoplelova NA, et al.

    Journal of Biological Chemistry. 2013, 288, 29621-29632

  58. Identification of different proaggregatory abilities of activated platelet subpopulations.

    Yakimenko AO, Verholomova FY, Kotova YN, Ataullakhanov FI, Panteleev MA.

    Biophysical Journal. 2012, 102, 2261-2269

  59. A simple, whole blood method for assessment of platelet function: application to dietary intervention.

    Allman-Farinelli MA, Bendall L, Troy J, Versluis C, Hall D, Favaloro EJ, et al.

    Thrombosis Research. 1998, 90, 163-169

  60. Close relationship between the platelet activation marker CD62 and the granular release of platelet-derived growth factor.

    Graff J, Klinkhardt U, Schini-Kerth VB, Harder S, Franz N, Bassus S, et al.

    Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 2002, 300, 952-957

  61. Different G protein-coupled signaling pathways are involved in alpha granule release from human platelets.

    Quinton TM, Murugappan S, Kim S, Jin J, Kunapuli SP.

    Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2004, 2, 978-984

  62. Coagulation factors bound to procoagulant platelets concentrate in cap structures to promote clotting.

    Podoplelova NA, Sveshnikova AN, Kotova YN, Eckly A, Receveur N, Nechipurenko DYu, et al.

    Blood. 2016, 128, 1745-1755

  63. Dual Mechanism of Integrin αIIbβ3 Closure in Procoagulant Platelets.

    Mattheij NJA, Gilio K, van Kruchten R, Jobe SM, Wieschhaus AJ, Chishti AH, et al.

    Journal of Biological Chemistry. 2013, 288, 13325-13336

  64. Procoagulant platelets: are they necrotic?

    Jackson SP, Schoenwaelder SM.

    Blood. 2010, 116, 2011-2018

  65. Compartmentalized calcium signaling triggers subpopulation formation upon platelet activation through PAR1.

    Sveshnikova AN, Ataullakhanov FI, Panteleev MA.

    Molecular BioSystems. 2015, 11, 1052-1060

  66. Mechanisms of increased mitochondria-dependent necrosis in Wiskott-Aldrich syndrome platelets.

    Obydennyi SI, Artemenko EO, Sveshnikova AN, Ignatova AA, Varlamova TV, Gambaryan S, et al.

    Haematologica. 2020, 105, 1095-1106

  67. Modulation and pre-amplification of PAR1 signaling by ADP acting via the P2Y12 receptor during platelet subpopulation formation.

    Shakhidzhanov SS, Shaturny VI, Panteleev MA, Sveshnikova AN.

    Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-General Subjects. 2015, 1850, 2518-2529

  68. Motor-driven marginal band coiling promotes cell shape change during platelet activation.

    Diagouraga B, Grichine A, Fertin A, Wang J, Khochbin S, Sadoul K.

    Journal of Cell Biology. 2014, 204, 177-185

  69. Tubulin in Platelets: When the Shape Matters.

    Cuenca-Zamora EJ, Ferrer-Marín F, Rivera J, Teruel-Montoya R.

    International Journal of Molecular Sciences. 2019, 20, NaN

  70. Platelet actin nodules are podosome-like structures dependent on Wiskott-Aldrich syndrome protein and ARP2/3 complex.

    Poulter NS, Pollitt AY, Davies A, Malinova D, Nash GB, Hannon MJ, et al.

    Nature Communications. 2015, 6, 7254

  71. latelet Shape Changes during Thrombus Formation: Role of Actin-Based Protrusions.

    Bender M, Palankar R.

    Hamostaseologie. 2021, 41, 14-21

  72. Platelet packing density is an independent regulator of the hemostatic response to injury.

    Mirramezani M, Herbig BA, Stalker TJ, Nettey L, Cooper M, Weisel JW, et al.

    Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2018, 16, 973-983

  73. WASP plays a novel role in regulating platelet responses dependent on αIIbβ3 integrin outside-in signalling.

    Shcherbina A, Cooley J, Lutskiy MI, Benarafa C, Gilbert GE, Remold‐O’Donnell E.

    British Journal of Haematology. 2010, 148, 416-427

  74. Platelets, diabetes and myocardial ischemia/reperfusion injury.

    Russo I, Penna C, Musso T, Popara J, Alloatti G, Cavalot F, et al.

    Cardiovascular Diabetology. 2017, 16, NaN

  75. Thromboxane A2: Mechanisms of Synthesis and Intracellular Signaling System of Realization

    Barinov EF.

    Kardiologiia. 2016, 56, 83-90

  76. Is arachidonic acid stimulation really a test for the response to aspirin? Time to think again?

    Olechowski B, Ashby A, Mariathas M, Khanna V, Mahmoudi M, Curzen N.

    Expert Review of Cardiovascular Therapy. 2017, 15, 35-46

  77. Group VIB calcium-independent phospholipase A2 (iPLA2γ) regulates platelet activation, hemostasis and thrombosis in mice.

    Yoda E, Rai K, Ogawa M, Takakura Y, Kuwata H, Suzuki H, et al.

    PLoS One. 2014, 9, e109409

  78. Regulation of platelet activation and coagulation and its role in vascular injury and arterial thrombosis.

    Tomaiuolo M, Brass LF, Stalker TJ.

    Interventional Cardiology Clinics. 2017, 6, 1-12

  79. The critical role of myosin IIA in platelet internal contraction.

    Johnson GJ, Leis LA, Krumwiede MD, White JG.

    Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2007, 5, 1516-1529

  80. Calpain Cleavage of Focal Adhesion Proteins Regulates the Cytoskeletal Attachment of Integrin αIIbβ3 (Platelet Glycoprotein IIb/IIIa) and the Cellular Retraction of Fibrin Clots.

    Schoenwaelder SM, Yuan Y, Cooray P, Salem HH, Jackson SP.

    Journal of Biological Chemistry. 1997, 272, 1694-1702

  81. Biphasic myosin II light chain activation during clot retraction.

    Egot M, Kauskot A, Lasne D, Gaussem P, Bachelot-Loza C.

    Thrombosis and Haemostasis. 2013, 110, 1215-1222

  82. Quantitative Morphology of Cerebral Thrombi Related to Intravital Contraction and Clinical Features of Ischemic Stroke.

    Khismatullin RR, Nagaswami C, Shakirova AZ, Vrtková A, Procházka V, Gumulec J, et al.

    Stroke. 2020, 51, 3640-3650

  83. Asymmetrical Forces Dictate the Distribution and Morphology of Platelets in Blood Clots.

    Kovalenko TA, Giraud M-N, Eckly A, Ribba A-S, Proamer F, Fraboulet S, et al.

    Cells. 2021, 10, 584

  84. Interspecies differences in protein expression do not impact the spatiotemporal regulation of glycoprotein VI mediated activation.

    Dunster JL, Unsworth AJ, Bye AP, Haining EJ, Sowa MA, Di Y, et al.

    Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2020, 18, 485-496

  85. Control of Platelet CLEC-2-Mediated Activation by Receptor Clustering and Tyrosine Kinase Signaling.

    Martyanov AA, Balabin FA, Dunster JL, Panteleev MA, Gibbins JM, Sveshnikova AN.

    Biophysical Journal. 2020, 118, 2641-2655

  86. Hierarchical organization in the hemostatic response and its relationship to the platelet-signaling network.

    Stalker TJ, Traxler EA, Wu J, Wannemacher KM, Cermignano SL, Voronov R, et al.

    Blood. 2013, 121, 1875-1885